Medicīniskās apaugļošanas tehnoloģijas un to lietošanai nepieciešamais tehnoloģiskais nodrošinājums
I. Vispārīgie jautājumi
1. Medicīniskā apaugļošana ir vīrieša un sievietes dzimumšūnu mākslīga sapludināšana.
2. Pirms medicīniskās apaugļošanas ginekologa (dzemdību speciālista) pienākums ir informēt potenciālos vecākus par medicīniskās apaugļošanas būtību un iespējamiem sarežģījumiem, kā arī par ģenētiskiem un medicīniskiem sarežģījumiem, kas var rasties bērnam.
3. Medicīnisko apaugļošanu veic atbilstoši likumos un normatīvajos aktos noteiktajām prasībām.
4. Donors – persona, no kuras tiek iegūtas olšūnas vai spermatozoīdi nolūkā ievadīt šīs šūnas citai personai.
5. Donora dzimumšūnu banka – specializēta medicīniska nozare, kas nodarbojas ar donoru atlasi, viņu kontroli. Realizē donoru dzimumšūnu uzkrāšanu, glabāšanu un uzskaiti.
7. Neauglība – dzimumbriedumu sasniegušu divu pretēju dzimumu personu nespēja radīt bērnu gada laikā, dzīvojot regulāru dzimumdzīvi bez kontracepcijas.
II. Termini un skaidrojumi
8. Olšūna – sievietes dzimumšūna:
8.1. folikuls – neliels, augošš pūslītis olnīcā, pildīts ar šķidrumu, kurā attīstās olšūna;
8.2. olnīcu stimulācija – medikamentozu hormonālu preparātu ievadīšana sievietes organismā, kas veicina folikulu un olšūnu nobriešanu;
8.3. ovulācija – folikula plīšana, kuras rezultātā olšūna izkļūst no olnīcas;
8.4. folikulu punkcija – operācija, kuru izdara olnīcu stimulācijas beigās, lai no olnīcu folikuliem iegūtu olšūnas.
9. Spermatozoīds – vīrieša dzimumšūna:
9.1. sperma – sēklas šķidrums, kurā atrodas spermatozoīdi:
9.1.1 oligoastenoteratozoospermija – spermas patoloģija, kuras gadījumā ir pazemināta spermatozoīdu koncentrācija, samazināts spermatozoīdu kustīgums un to morfoloģija neatbilst kritērijiem;
9.1.2. oligospermija – spermatozoīdu koncentrācija ejakulātā - spermas porcijā, mazāka nekā 20 milj./ml.;
9.1.3. azoospermija – spermas šķidrumā nav spermatozoīdu.
18.2. azoospermijas neobstruktīvās formas (spermatoģenēzes apstāšanās dažādās attīstības stadijās);
18.3. ja nav iespējams iegūt spermatozoīdus no sēkliniekiem punkcijas rezultātā;
18.4. azoospermijas destruktīvās formas;
18.5. staru slimība un staru terapija, lietota vīrietim;
18.6. vīrieša ģenētiskas saslimšanas;
18.7. smaga rēzus faktora nesaderība;
18.8. atkārtoti nesekmīgi ICSI gadījumi;
18.9. sievietes bez partnera.
19. Indikācijas inseminācijai:
19.1. sievietes neauglība:
19.1.1. dažāda veida konservatīva neauglības ārstēšanas metode, pēc kuras gada laikā nav iestājusies grūtniecība;
19.2. vīrieša neauglība:
19.2.1. vieglas formas asteno- un teratozoospermija;
19.2.2. anspermālās antivielas;
19.2.3. seksuālās disfunkcijas.
20. Indikācijas olnīcu stimulācijai:
20.1. sievietes neauglība:
20.1.1. anovulācija (neveidojas folikuļi);
20.1.2. sagatavošana IVF;
20.1.3. sagatavošana ICSI.
21. Indikācijas donoru olšūnu un donoru embriju izmantošanai:
21.1. iedzimta olšūnu patoloģija;
21.2. iegūta olnīcu mazspēja (pēc staru un ķīmijterapijas);
21.3. liels risks, ka bērns pārmantos no mātes ģenētisku slimību;
21.4. pacienta vecums virs 40 gadiem, kad pēc ovulācijas stimulēšanas neizdodas iegūt olšūnas;
21.5. neizskaidrojama vairāku grūtniecību spontāna pārtraukšana;
21.6. vairākkārtīgi stimulējot ovulāciju, nav izdevies iegūt olšūnu.
22. Dzimumšūnu donora izvēle:
22.1. par dzimumšūnu donoru var būt vesela persona: vīrietis vecumā no 18 līdz 45 gadiem un sieviete vecumā no 18 līdz 35 gadiem;
22.2. potenciālais dzimumšūnu donors tiek medicīniski izmeklēts.
IV. Medicīniskās apaugļošanas tehnoloģijas
23. Dzimumšūnu donora izmeklēšana pirms medicīniskās apaugļošanas tehnoloģiju lietošanas:
23.1. fiziska un lokāla izmeklēšana;
23.2. laboratoriskie izmeklējumi:
23.2.1. sievietēm – mātēm un olšūnu donorēm:
23.2.1.1. asins grupas, rēzus faktora noteikšana;
23.2.1.2. seksuāli transmisīvo slimību, sifilisa, HIV, B un C hepatīta, gonorejas, trihomonozes, toksoplazmozes, mikoplazmas infekcijas, ureaplazmas infekcijas, diagnostika;
23.2.1.3. hormonāla izmeklēšana 2. vai 3. menstruālā cikla dienā – folikulstimulējošā hormona, lutinizētājhormona hormona, estradiola līmeņa noteikšana;
23.2.1.4. hormonāla izmeklēšana 20. – 22. menstruālā cikla dienā – prolaktīna, progesterona, testosterona, tireotropā hormona, trijodtironīna, tiroksīna līmeņa noteikšana;
23.2.2. vīriešiem – tēviem un spermas donoriem:
23.2.2.1. spermogramma;
23.2.2.2. seksuāli transmisīvo slimību, sifilisa, HIV, B un C hepatīta, gonorejas, trihomonozes, toksoplazmozes, mikoplazmas infekcijas, ureaplazmas infekcijas, diagnostika.
23.3. In vitro apaugļošanās (IVF) ceļā iegūtu embriju bioloģiskā materiāla sagatavošana preimplantācijas ģenētiskai diagnostikai (PGD). (Pielikums) MT 15-023
24. Spermas sasaldēšana un atsaldēšana:
24.1. spermas sasaldēšana:
24.1.1. spermai ļauj sašķidrināties 30 minūtes istabas temperatrūrā, aizpilda spermas uzglabāšanas protokolu;
24.1.2. sajauc spermu ar sasaldēšanas vidi attiecībā 1:1, lēni pie spermas pilinot klāt sasaldēšanas vidi 10 minūšu laikā;
24.1.3. sagatavoto maisījumu pārnes sasaldēšanas stobriņos 0,5 ml katrā stobriņā;
24.1.4. stobriņu ievieto turētājstobrā un inkubē +4˚C temperatūrā 30 minūtes;
24.2.1. stobriņu ar sasaldētu spermu izņem no slāpekļa un tur istabas temperatūrā 1 minūti;
24.2.2. stobriņu ievieto 37˚C ūdens vannā un spermu atsaldē.
25. Embriju sasaldēšana un atsaldēšana:
25.1. embriju sasaldēšana:
25.1.1. Nunc četru ailīšu platē, pa vienai ailītei no katra, ienes 0,5 ml F1, F2 un F3 šķīdumus un sasilda līdz istabas temperatūrai;
25.1.2. ar mikrokapilāru pārnes embrijus uz F1, inkubē 5minūtes;
25.1.3. pārnes embrijus uz F2, inkubē 10 minūtes;
25.1.4. pārnes embrijus uz F3 un iesūc sasaldēšanas salmiņā ar 1ml šļirci. Iesūc 2 cm barotni, gaisa burbulis, 2cm barotnes ar embrijiem, gaisa burbulis, barotne līdz stobriņš pilns;
25.1.5. aizkorķē stobriņu un sāk sasaldēšanas programmu;
25.1.6. pēc sasaldēšanas stobriņu pārnes turētājstobriņā un iegremdē šķidrā slāpeklī;
25.2. embriju atsaldēšana:
25.2.1. sagatavo Nunc plati ar TM1, TM2, TM3, un IVF Medium šķīdumiem, katrā ailītē 0,5 ml (šķīdumiem jābūt istabas temperatūrā);
25.2.2. izņem salmiņu no šķidrā slāpekļa un 30 sekundes tur gaisā;
25.2.3. ievieto salmiņu +30˚C ūdens vannā 30 sekundes;
25.2.4. nogriež salmiņa galu un tam pievieno 1 ml šļirci;
25.2.5. nogriež salmiņa otru galu un uzmanīgi kontrolējot binokulārajā lupā, ienes embrijus TM1 šķīdumā;
25.2.6. inkubē 5 minūtes;
24.2.7. ar mikrokapilāru pārnes embrijus uz TM2 šķīdumu un inkubē 5 minūtes;
25.2.8. pārnes embrijus uz TM3 un inkubē 5 minūtes;
25.2.9. pārnes embrijus uz IVF Medium un inkubē 5 minūtes;
25.2.10. novērtē embrijus mikroskopā (embriji derīgi embriotransfēram, ja vismaz 50% no šūnām pēc atsaldēšanas ir dzīvas);
25.2.11. veic embriotransfēru vai turpina kultivēt vienu dienu, ja embrijs turpina dalīties.
26. Spermas iegūšana un sagatavošana mākslīgai apaugļošanai:
26.1. spermas iegūšana no dzimumšūnu donora;
26.2. nesasaldētas spermas sagatavošana:
26.2.1. sw up metode – izmanto, ja spermas kvalitātes rādītāji ir labi;
26.2.2. spermatozoīdu izolēšana blīvuma gradientā - izmanto, ja spermas kvalitātes rādītāji ir slikti;
29.8. atlikušo kvalitatīvo embriju sasaldēšana, ja ir vairāk embriju kā nepieciešams embriotransfēram, analoģiski 24.punktā norādītajam.
V. Mākslīgās apaugļošanas tehnoloģiju pielietojumam nepieciešamie resursi
30. Medicīnisko apaugļošanu veic veselības aprūpes jomu regulējošo normatīvo aktu noteiktā kārtībā izvērtētā un obligātām prasībām atbilstošā ārstniecības iestādē:
30.1. ambulatorās iestādes dienas stacionārā;
30.2. stacionārā ārstniecības iestādē.
31. Iesaistītie speciālisti:
31.1. sertificēts ginekologs (dzemdību speciālists) – veic sievietes dzimumorgānu izmeklēšanu, olnīcu stimulāciju ultrasonoskopijas un hormonālo izmeklējumu kontrolē, olnīcu punkciju un embriju ievadīšanu dzemdē ultrasonoskopijas kontrolē;
31.2. sertificēts urologs – veic vīrieša dzimumorgānu izmeklēšanu, kad tas nepieciešams, vīrieša fertilitātes novērtēšanu veicot spermas analīzi, testis punkciju, ja tas nepieciešams;
31.3. embriologs – veic dzimumšūnu izolāciju, aktivāciju, apaugļošanu un embriju kultivēšanu in vitro, sagatavo embrijus pārnešanai sievietes dzemdē vai olvadā, kā arī veic embriju sasaldēšanu vai atsaldēšanu.
32. Telpu nodrošinājums:
32.1. telpa ginekoloģiskām apskatēm, inseminācijām un ultrasonoskopiskai izmeklēšanai;
32.2. procedūru telpa, kurā aseptiskos apstākļos veic olnīcu folikulu punkciju un embriju pārnešanu dzemdē ultrasonoskopijas kontrolē;
32.3. laboratorija – telpa, kurā aseptiskos apstākļos veic visus darbus ar dzimumšūnām un embrijiem;
32.4. telpa, kurā uzglabā sasaldētas dzimumšūnas, embrijus un šķidrā slāpekļa konteinerus.
33. Medicīniskās ierīces:
33.1. ultraskaņas izmeklēšanas aparāts ar abdominālo un vaginālo zondi;
33.2. vaginālās zondes adapteris un marķētas adatas olnīcu folikulu punkcijai;
33.3. laminārās plūsmas skapis ar filtrētu (sterilu) gaisa plūsmu;
33.4. CO2 termostats ar 37˚C temperatūru (pieļaujamā novirze 0,1˚C) un CO2 5% koncentrāciju (pieļaujamā novirze 0,1%);
33.5. centrifūga ar 1500 apgr./min.;
33.6. lupa ar apsildāmu (37˚C) galdiņa virsmu;
33.7. invertētais mikroskops ar maksimālo palielinājumu līdz 400 reizēm, Hofmaņa modulācijas sistēmu un apsildāmu (37˚C) virsmu;